HET-CAM

O protocolo HET-CAM, primeiramente descrito por Luepke (1985), usa uma membrana vascular fetal, a membrana corioalantóica (“chorioallantoic membrane”, CAM) de ovo de galinha. A CAM tem sido proposta como um modelo para uma membrana viva (como a conjuntiva), uma vez que esta apresenta uma vascularidade funcional. O teste do HET-CAM está atualmente no processo de validação da ECVAM (“European Centre for the Validation of Alternative Methods”), que já é aceito pelo REACH e pelo ICCVAM como um método para identificar irritantes severos e compostos corrosivos, bem como realizar screening de formulações com o objetivo de reduzir o número de animais utilizados no teste ocular de Draize.

Princípio do teste:

Avaliação de coagulação (como desnaturação de proteína) pode refletir dano na córnea, causada por uma substância teste. Os efeitos agudos induzidos por uma substância teste sobre pequenas veias sanguíneas e proteínas desta membrana possuem efeitos similares induzidos pela mesma substância teste aplicadas no olho de um coelho. Os “endpoints” utilizados para avaliar os danos causados na membrana corioalantóica são: hiperemia, hemorragia, lise e coagulação, aonde:
- Hiperemia: aumento do fluxo sanguíneo
- Hemorragia: extravasamento de sangue dos vasos
- Lise: ruptura dos vasos
- Coagulação: presença de coágulo sanguínea

Através da medida qualitativa destes “endpoints” (como tempo de desenvolvimento e a severidade do efeito observado), pode ser determinada uma pontuação para cada “endpoint” avaliado.

Referências Bibliográficas:

- NIH Publication No: 06-4515 (2006). “Background Review Document: Current Status of In Vitro Test Methods for Identifying Ocular Corrosives and Severe Irritants: Hen’s Egg Test – Chorioallantoic Membrane Test Method”; Research Triangle Park: National Institute of Environmental Health Sciences.

- Luepke N, Kemper F. (1986). “The HET-CAM test: an alternative to the Draize eye test”. Food Chem Toxic; 24: 495-496.

- Luepke N. (1985). “Hen's egg chorioallantoic membrane test for irritation potential”. Food Chem Toxic; 23: 287-291.

- Steiling W, Bracher M, Courtellemont P, de Silva O. (1999). “The HET-CAM, a useful in vitro assay for assessing the eye irritation properties of cosmetic formulations and ingredients”. Toxic In Vitro; 13: 375-384.

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